非洲綠猴腎細胞是從正常成年非洲綠猴的腎臟組織中分離建立的。該細胞常作為轉(zhuǎn)染宿主，用于支原體的檢測。細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至狀態(tài)良好后灌滿培養(yǎng)基運輸，獲得細胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超凈臺中操作；如細胞生長至70%-80%，將瓶中的培養(yǎng)基移入無菌瓶中留作培養(yǎng)使用，保留5-8mL培養(yǎng)基在37℃、5%的CO2的溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)至90%-100%后，按要求消化傳代；棄去培養(yǎng)基，用無菌PBS或者其他緩沖液清洗細胞2次，加入適量胰蛋白酶消化（EDTA胰酶），待細胞*脫壁后加培養(yǎng)基吹打混勻，分瓶培養(yǎng)。

　　非洲綠猴腎細胞Vero可能作為表達外源蛋白質(zhì)的有用細胞。作為一種連續(xù)傳代的靈長類細胞，Vero細胞的糖基化酶可能與人類的相似。Vero細胞可以大規(guī)模培養(yǎng)，已經(jīng)用于脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗的生產(chǎn)。研究了不同條件下Vero細胞的轉(zhuǎn)染效率，包括脂質(zhì)體和DNA的濃度，細胞數(shù)量以及細胞暴露于脂質(zhì)體-DNA混合物中的時間。通過檢測報告基因β-gal確定轉(zhuǎn)染效率，優(yōu)化不同轉(zhuǎn)染參數(shù)，提高了Vero細胞脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的效率和表達水平。

　　非洲綠猴腎細胞進行細胞傳染的步驟：

　　（1）在24孔細胞培養(yǎng)板中，以2.5~7.5×10°細胞/孔接種細胞于0.5ml適當*培養(yǎng)基中。

　?。?）37℃過夜培養(yǎng)細胞，直到細胞生長至50~80%匯和。

　?。?）在滅菌的Eppendorf管中準備下列溶液

　　溶液A：用25u1無血清培養(yǎng)基稀釋0.25～0.5ug pCDNA3LacZ。

　　溶液B：用25ul無血清培養(yǎng)基稀釋0.5~6.25ul lipofectAMINE試劑。

　?。?）溫和混合兩溶液，室溫放置15~45分鐘以利于DNA-脂質(zhì)體復合物的形成，與此同時，用0.5ml無血清培養(yǎng)基沖洗細胞一次。

　　（5）混合物中加入0.2ml無血清培養(yǎng)基，溫和混合，加入到漂洗過的細胞中。

　?。?）37℃二氧化碳溫箱溫育2~24小時。

　?。?）溫育結(jié)束后，不清除轉(zhuǎn)染混合物直接加入含兩倍濃度血清的培養(yǎng)基。

　?。?）轉(zhuǎn)染18~24小時后，換以新鮮的*培養(yǎng)基。

　　（9）48小時后，收獲細胞或開始篩選。